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2. ERGEBNISSE 83

2.4.1.9 Reinigung von EGFP fusioniert mit dem HeliTag M13 (HeliTag M13-EGFP)

Um die Eigenschaften des im High-Throughput Screening (HTS) gefundenen und im MTS

schon verifizierten HeliTags M13 genauer zu untersuchen wurde HeliTag M13-EGFP in einer

mit Chelating Sepharose gepackten Säule, durch FPLC gereinigt (Abbildung 2.24).

Abbildung 2.24: Verlauf der Metallaffinitäts-Reinigung von HeliTag M13-EGFP.

Absorption (254 nm) (■), relative Fluoreszenz in den Fraktionen (●)

(Die Aufzeichnung der Absorption über 70 ml hinaus war auf Grund der

Eigenabsorption des Imidazols nicht mehr sinnvoll).

Der Einsatz dieser Apparatur ermöglichte die Verwendung eines linearen Imidazolgradienten

und damit schonendere Bedingungen zur Elution. Wie Abbildung 2.25A qualitativ zeigt, band

das HeliTag M13-EGFP vollständig im oberen Bereich der Säule. In den nachfolgenden

Waschschritten konnte visuell kein HeliTag M13-EGFP mehr detektiert werden. Die gesamte

Menge an EGFP wurde mit dem Gradienten eluiert und verteilte sich auf zwei Fraktionen

(Abbildung 2.25B zeigt diese beiden Fraktionen in einem Reaktionsgefäß vereinigt). Dies

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