Bosch PPS8 C2 Series Manual do Utilizador descarregar pdf (Página 123)

5. MATERIAL & METHODEN 122

Die Vervielfältigung der DNA wird durch eine Dreischrittsequenz erreicht:

• Denaturierungsschritt: Die zu amplifizierende DNA wird bei einer Temperatur >92 °C in

ihre Einzelstränge zerlegt.

• Primer-Anlagerung (Annealing): Die Primer lagern sich sequenzspezifisch bei einer

Temperatur von 37-72 °C an die Zielregionen der beiden DNA Einzelstränge an. An dem

entstehenden Stück doppelsträngiger DNA beginnt die Polymerase im nächsten Schritt

mit der Synthese.

• Synthese (Extension): Bei 72 °C verlängert die Polymerase den zweiten DNA Strang in

5´-3´-Richtung.

Tabelle 5.7: Zusammensetzung einer typischen PCR Reaktion

Komponente Volumen

10 x Reaktionspuffer (KCl (100 mM), (NH

)

(100 mM),

Tris-HCl (200 mM, pH 8,8), MgSO

(20 mM), Triton X-100

(1% (w/v))

10 µl

dNTP´s (10 µM einer 10 mM Mischung) 8 µl

DNA-Matrize x µl (ca. 0,1 µg)

1. PCR Primer 1 µl (100 pmol)

2. PCR Primer 1 µl (100 pmol)

MgCl

(25 mM) 8 µl

Taq-Polymerase 1 µl (ca. 1 Unit)

Total volume 100 µl (mit dH

O auffüllen)

Mineralöl ca. 70 µl

1 2 ... 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 ... 152 153

Sem comentários

Bosch PPS8 C2 Series Manual do Utilizador Página 123