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3. DISKUSSION 101

Die niedrige Aktivität für Triglyceride mit längeren gesättigten Fettsäuren sind zum Teil auf

die schlechtere Emulgierbarkeit der entsprechenden Substrate und damit einhergehend des

Fehlens der Grenzflächenaktivierung der Lipasen zurückzuführen. Einen Hinweis darauf gibt

die hohe Aktivität gegenüber Triolein (C18:1), die nur von den optimalen Substraten

Tricaprylin (C8:0) und Tricaprin (C10:0) übertroffen wird.

Der Vergleich der Eigenschaften der nativen ROL bzw. RDL aus E. coli hat gezeigt, daß die

rekombinanten Enzyme ähnliche Eigenschaften wie der Wildtyp haben (Beer 1994, Ben

Salah, et al. 1994, Haas, et al. 1991, Haas, et al. 1992, Joerger undHaas 1993). Die reife

Lipase, die in Pichia pastoris produziert wurde, reiht sich in diese Auflistung nahtlos ein und

stellt somit eine echte Alternative bzw. Weiterentwicklung zur Expression in E. coli dar. Die

erhöhte Thermostabilität der in Pichia pastoris exprimierten Lipase ist dabei ein weiterer

Vorteil.

3.5 Entwicklung einer Tag-Toolbox durch Zufallsmutagenese der

Metallbindungsstelle der ATPase 439 aus Helicobacter pylori

3.5.1 Herstellung einer Bibliothek unterschiedlicher Tagsequenzen und deren

Validierung

Die Herstellung von Peptidsequenzen mit Hilfe degenerierter Oligonukleotide ist eine ein-

fache und effektive Methode um eine variable Bibliothek an möglichen Metallbindungsstellen

zu erhalten. Durch die Degenerierung des genetischen Codes ist jedoch die Häufung von

Aminosäuren, die durch mehrere Codons codiert werden höher als solche, die nur durch ein

Codon codiert werden (z. B. Prolin wird durch CCA, CCT, CCG und CCC, Methionin jedoch

nur durch ATG kodiert). Bei den sequenzierten Klonen konnte davon a/jointfilesconvert/483621/bgesehen jedoch keine

signifikante Kummulation bestimmter Sequenzen entdeckt werden.

Die Fusion an einen geeigneten Reporter erleichtert das Auffinden von Sequenzen mit der

gewünschten Sequenz im High-Throughput Screening. Darüber hinaus kann durch die in vivo

Herstellung im Gegensatz zur chemischen Synthese eine nahezu beliebige Menge des Peptids

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