Bosch PPS8 C2 Series Manual do Utilizador descarregar pdf (Página 77)

2. ERGEBNISSE 76

2.4.1.2 Verwendung des Green Fluorescent Proteins (EGFP) zur Validierung des HeliTags

Um eine quantitative Auswertung der Eignung der HeliTags zur Proteinreinigung zu ermögli-

chen, wurde ein möglichst einfach zu detektierender Reporter gesucht. Dieser sollte eine

Reihe von Eigenschaften besitzen:

1. In E. coli aktiv exprimierbar.

2. Möglichst geringe Molmasse.

3. In einem möglichst weiten pH Bereich stabil.

4. Stabil in Imidazol-Lösungen mindestens bis zu einer Konzentration von 0,5 M.

5. Einfach, möglichst visuell, detektierbar.

6. Quantifizierbar.

7. Geeignet für Hochdurchsatzverfahren.

0,00,20,40,60,81,0

10000

20000

30000

40000

50000

Fluoreszenz

Relative GFP Konzentration

Abbildung 2.20: Korrelation zwischen EGFP Konzentration und gemessener

Fluoreszenz.

Da EGFP alle diese Voraussetzungen erfüllt wurde es als Reporterprotein verwendet, um eine

schnelle visuelle Detektion der Bindungseigenschaften ohne einen zusätzlichen Aktivitätstest

zu ermöglichen (Poppenborg, et al. 1997). Durch die Messung der Fluoreszenz konnte ein

1 2 ... 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 ... 152 153

Sem comentários

Bosch PPS8 C2 Series Manual do Utilizador Página 77