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2. ERGEBNISSE 81

Auch die mit EGFP X

-M13 HeliTag transformierten E. coli Zellen exprimierten aktives

EGFP (EGFP X

-M13 HeliTag-Protein). Die Kultivierung dieses Klons und die nach der Lyse

durchgeführte IMAC zeigte, daß die Fusion der X

-Erkennungssequenz keinen Einfluß auf die

Funktion des HeliTags M13 hatte.

2.4.1.8 Durchmusterung auf neue Peptidsequenzen zur IMAC (HeliTags)

Kolonien, die im UV-Licht grün fluoreszierten wurden selektiert und in Mikrotiterplatten in

LB-Medium kultiviert. Nach der Herstellung einer Replikaplatte wurden die Zellen aufge-

schlossen und der fluoreszierende Überstand in eine neue Platte überführt, um den Referenz-

wert zu bestimmen.

0,00

10,00

20,00

30,00

40,00

50,00

60,00

70,00

80,00

90,00

100,00

Reinigungsschritt

HeliTag A1

HeliTag A14

HeliTag M13

ohne Tag

Abbildung 2.22: Medium Throughput Screening (MTS) mit Qiagen Ni-NTA Säulen zur

Validierung von HeliTags.

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